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當前位置:首頁產品中心細胞生物學細胞凋亡AC12L033Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

產品簡介

Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒為Annexin V與PI聯合使用的試劑盒,用于檢測細胞凋亡早期的發生,可區分凋亡早期凋亡細胞和晚期凋亡或壞死細胞。

產品型號:AC12L033
更新時間:2025-06-11
廠商性質:生產廠家
訪問量:2882
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品牌Life-iLab/李記生物CAS/
分子式/純度/
分子量/貨號AC12L033
規格100T供貨周期現貨
主要用途區分凋亡早期凋亡細胞和晚期凋亡或壞死細胞。應用領域生物產業

Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒

產品描述
Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒為Annexin V與PI聯合使用的試劑盒,用于檢測細胞凋亡早期的發生,可區分凋亡早期凋亡細胞和晚期凋亡或壞死細胞。
Annexin V為胞內蛋白膜聯蛋白家族成員,以鈣離子依賴的方式選擇性與磷脂酰絲*酸(PS)結合。PS正常分布在細胞膜內側。PS外翻到細胞膜外是不同類型的細胞在凋亡早期的明顯特征,用帶有FITC標記的Annexin V,即Annexin V-FITC,可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測到這一重要特征。FITC呈現黃綠色熒光。
PI(Propidium Iodide, 碘化丙啶)是一種可對 DNA 染色的細胞核染色試劑,在嵌入DNA 后釋放紅色熒光。PI不能穿透完整的細胞膜,但可以穿透壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞。
Annexin V-FITC與PI聯合使用時,PI 被排除在活細胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡細胞(Annexin V+/PI-)外,而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被 FITC 和PI 結合染色呈現雙陽性(Annexin V+/PI+)。
FITC最大吸收波長和激發波長分別為494nm和518 nm,PI-DNA復合物的最大吸收和發射波長分別為535 nm和617 nm。
訂購信息

產品名稱 貨號 規格
Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒 AC12L033 100T

產品組分

產品組分 規格
Annexin V-FITC 500 μL
Propidium iodide 1 mL
Binding Buffer(1×) 100 mL

運輸與保存
藍冰運輸。4℃避光保存,有效期18個月。【注】:不可冷凍。
使用方法
下列實驗方案以利用星形孢菌素誘導 Jurkat 細胞凋亡為例,如果使用其他誘導劑和其他類型的細胞,實驗條件需要略作調整。
1.流式細胞檢測

  1. 根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品,作為陰性對照。此外,建議設定一組樣品做(Annexin V-FITC或PI)單染,用于調節補償。

  2. 收集細胞。

懸浮細胞:300 g,4℃離心 5 min 收集細胞;
貼壁細胞:用不含 EDTA 的胰*消化后 300 g,4℃離心 5 min收集細胞,胰*消化時間不宜過長,以防引起假陽性。【注】:用胰蛋*酶消化然后使細胞在最佳細胞培養條件和培養基中恢復約30 min,然后再染色。胰*白酶消化會暫時破壞質膜,允許Annexin V-FITC結合磷脂酰絲*酸在細胞膜的細胞質表面上,從而導致假陽性染色。

  1. 用預冷的 PBS 洗滌細胞兩次,每次均在 300 g,4℃ 下離心 5 min,收集 1-5×105 個細胞并用 100 μL 1×結合緩沖液重懸細胞。

  2. 每管加入 4-5 μL 的 Annexin V-FITC5 μL 的 PI工作液。【注】:推薦準備兩管額外的流式管,每管只加入一種單染染料(Annexin V-FITC或PI),用于流式單染的補償調節。

  3. 室溫避光孵育 10-15 min,為避免細胞凋亡進程,孵育過程可在冰上操作。

  4. 每管加入 400 μL 的 PBS 或 1×結合緩沖液,盡快通過流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。Annexin V-FITC 可以由 488nm 激光激發,檢測熒光發射光譜約在 530 nm 處(FITC 通道),PI 通道發射光譜約在 617 nm 處。【注】:PBS 或 1×結合緩沖液的選擇根據不同凋亡處理以及不同細胞具體選擇。

2.熒光顯微鏡檢測
對于懸浮細胞,可參照流式細胞檢測的方法進行具體操作。

  1. 在蓋玻片或載玻片小室中接種細胞。

  2. 根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品,作為陰性對照。

  3. 用 PBS 洗滌細胞。【注】:細胞收集后如果不用 PBS 清洗,可以用含血清的培養基直接替代Annexin V 結合緩沖液,但是 Annexin V 的使用濃度需要重新優化。

  4. 每 100 μL 的 Annexin V 結合緩沖液中加入 5-25 μL Annexin V-FITC5 μL 的 PI。【注】:最佳使用濃度由具體實驗要求確定。

  5. 向培養板中加入足量的染液以覆蓋全部細胞,室溫避光孵育 15-30 min。為避免細胞凋亡進程,孵育過程可在冰上操作,但孵育時間至少延長至 30 min。

  6. 用 1×結合緩沖液清洗細胞。

  7. 將孵育有細胞的蓋玻片置于載玻片上,載玻片可提前加一滴 1×結合緩沖液;對于培養在小室內的細胞,可直接加入足量的 1×結合緩沖液覆蓋細胞。

  8. 使用合適的濾光片在熒光顯微鏡下觀察細胞。Annexin V-FITC 可用 FITC 適用的濾光片,PI 可用 Cy3 或者 Texas。

注意事項

  1. 本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

  2. 熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

  3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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